MicroRNAs (miRNAs) são RNAs não codificantes de fita simples e altamente conservado entre as espécies, podendo ser compostos por 17-25 nucleotídeos, que funcionam como reguladores da expressão gênica, inibindo a função e facilitando a degradação de RNAs mensageiro (mRNA) alvos. Em trabalhos recentes, nosso grupo de pesquisa identificou que o miRNA espermático 425-5p é adicionado ao espermatozoide durante a maturação epididimária e que altos níveis desse miRNA favorecem o desenvolvimento embrionário inicial em bovinos. No presente trabalho, pretende-se identificar os processos moleculares da ação deste miRNA na embriogênese e como e em que porção do epidídimo ele é adicionado ao espermatozoide, o que é relevante para a compreensão da função espermática e para identificar e explicar parte dos frequentes problemas de fertilidade de touros que não são identificados ou explicados pelas metodologias tradicionalmente utilizadas. Uma vez isto esclarecido, serão testados protocolos de incorporação do miRNA 425-5p aos espermatozoides, o que provavelmente ampliará a eficiência de amostras de sêmen tratadas. Para tal será utilizada qPCR e LNA RNA-fish de espermatozoides coletados na cabeça, corpo e cauda do epidídimo, bem como da mucosa e de vesículas extracelulares (epididimossomos) destas três regiões. Também serão utilizados HPLC, LC-MS e eletroforese 2D para identificação de substâncias que podem ser precursoras da interação epididimossomo espermatozoide ou outros tipos de interação e internalização do miRNA. Por meio de um estudo in sílico serão selecionados os principais genes alvos que provavelmente serão afetados por este miRNA na embriogênese. Posteriormente serão produzidos embriões por ICSI tradicional, com precursor e com o inibidor deste miRNA, e seus efeitos serão avaliados morfologicamente e por qPCR dos genes alvos selecionados. Finalmente serão testados protocolos de incorporação do miRNA aos espermatozoides, os quais serão testados em PIVE e IATF.